ecL化學(xué)發(fā)光液注意事項(xiàng)，由于不同品牌的抗體質(zhì)量不同，以及抗體的保存條件和保存時(shí)間的不同，初次使用時(shí)建議對(duì)抗體用量進(jìn)行優(yōu)化，以取得更優(yōu)效果。勿將ECL化學(xué)發(fā)光底物試劑盒暴露在陽光或強(qiáng)光下，否則會(huì)導(dǎo)致其失活；建議保存在棕色瓶中，并避免長(zhǎng)時(shí)間暴露在陽光下，實(shí)驗(yàn)室光照對(duì)試劑盒影響不大；除了X光膠片曝光和洗片處理外，所有步驟均不必在暗室中操作。使用充足的洗滌緩沖液、封閉液、抗體稀釋液和底物工作液去覆蓋印跡膜，以確保印跡膜處于濕潤(rùn)狀態(tài)；使用大量的封閉液和洗滌液能減少非特異性信號(hào)的產(chǎn)生。使用前配制ECL工作液，體積足夠覆蓋膜片即可；取A液和B液時(shí)一定要用不同的槍頭，互相污染可能導(dǎo)致緩慢失活；配制完畢建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時(shí)后仍可使用但靈敏度略有降低；棄去使用過的混合試劑。印跡膜與ECL工作液孵育后約2 min時(shí)發(fā)出的光，然后隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而緩慢減弱，至30 min仍可保持90%的光信號(hào)，至24小時(shí)仍可保持約60%的光信號(hào)；蛋白點(diǎn)熒光較弱時(shí)可以適當(dāng)延長(zhǎng)曝光時(shí)間；使用過少的ECL工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小，但勿降低ECL工作液使用比例。使用生物素/親和素體系時(shí)，避免使用脫脂奶粉作為封閉液，因?yàn)槊撝谭壑泻卸喾N內(nèi)源性生物素，容易產(chǎn)生非特異性信號(hào)。避免將多張膜置于同一個(gè)洗膜盒內(nèi)洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景。